机遇在学习及生活或工作中像一个幽灵,无处不在,让你梦牵萦绕,和你擦肩而过,偶又不期而遇,只是因为我把握住了机遇,才让我在百千想跻身省中医的大军中战斗到最后。首战告捷之后,我才相信上天着实待我不薄,更相信机遇是留给有备而来之人,于是,躺在书桌最底层的《组织病理学技术》才有被我翻出来细细品,为更多的机遇时刻准备着。这本是虽是大学时期由学校发放的唯一一本病理技术相关的书,但一个班级却只有十来本,一不作为上课的学习计划,现在来到省中医病理科工作,甚觉得拥有这本书的我是何其幸运。
《组织病理学技术》是由山东大学医学院的病理学教研室的二三十位老师共同编写的病理丛书,被评为国家“十一五”重点图书和现代生物医学科研技术丛书,主要特点是专家牵头,内容全面,简单实用,简明扼要的阐述了常规病理技术,免疫病理技术,分子病理技术,细胞培养技术等等,我遵循由浅入深,循序渐进的原则,也因初入病理科便着重品味了常规病理技术一块,对我的工作也有很大的帮助。
常规病理技术是病理技术的基础、核心,其主要步骤包括取材,固定,脱水,透明,浸蜡,包埋,切片贴片及HE染色和封片、出片一系列完整有序的过程,组织的切片质量好坏、是否利于切片,完全依赖于组织处理的每一个步骤,而每一个步骤的质量又与前一个步骤密切有关,各个步骤相辅相成,互相影响,每个步骤都完成得很成功病理医生才能更好的诊断。
固定效果好事成功的前提,固定是技术组的第一步,也是出了问题最难补救的一步,讲离体组织浸入某些化学试剂中是,使组织细胞内的物质尽量保持其生活状态时的形态结构和位置,这一过程叫做固定。固定不仅要保存组织形态的完整性,而且要保存组织细胞的抗原性,若处理不当会造成抗原的丢失,影响病理诊断和实验结果。各种固定液都大同小异,经过师兄师姐的经验,10%的中性福尔马林及4%的甲醛PBS溶液,各个医院的固定方式也不尽相同,但对于各种内镜钳取的组织标本,如胃肠粘膜,膀胱粘膜,气管粘膜,等一般都很小,只有0.1cm甚至0.05cm至小米粒大小。在组织处理流程中容易漏掉丢失,也给包埋和切片带来了诸多不便,处理方法也都朝着在包埋切片前将小标本染色标记的方向改进,之前了解到的方法之一是在取材的时候滴一滴伊红到标本上再进行固定脱水等流程,但到包埋切片的时候颜色已经变成了浅红色了,方法之二是在一篇论文上看到的,他们在取材和包埋前都会用伊红蘸染一下,理由是颜色很深,更利于切片。相比他们的标记方法我更钦佩我们科——每两升中性福尔马林中加入7-8g伊红粉剂配制而成的溶液来浸染固定取材后的胃肠镜小标本再上机脱水,大大节约了滴染的时间也增强了标记效果,不由得对我们科的师兄师姐的智慧佩服得五体投地。但是浸染也会遇到包埋时发现颜色变浅的时候,特别是节假日标本处理时间长,我认为是标本在福尔马林中浸泡固定太久导致的,不过这样的情况并不多,也不会对包埋切片有太大的影响。
脱水的效果好是成功的保障,脱水是指脱去组织内的水分,即借某些媒介置换组织内的水分的过程。一般经过固定的组织内常含有较多水分,而水不能与蜡混合,因此在浸蜡之前必须脱去组织块中的水分。脱水要求在最短的时间内使组织脱水彻底,收缩度,硬度适中,切片舒展,好切,而高浓度的酒精使组织脱水更彻底,所以脱水酒精浓度选择从低浓度酒精开始,一是利于洗脱脂肪,二是防止组织过度收缩影响制片。
包埋正确是制片成功的关键,虽然良好的组织切片需要合适的组织固定、准确的组织处理和精致的组织切片保证,但是最容易毁坏组织切片的步骤是不合适的组织包埋,即组织不合适的摆放和不合适的排列方向,胃肠镜小标本给我的印象特深,因为组织很小,比较难区分组织包埋方向,偶尔会出现切片出来只能看到组织的一个层面,增加了阅片的难度,所以我们必须熟悉每一个包埋组织标本的各项元素,认真分析它们的结构,仔细判断它们在包埋模中的位置,同时也要多与病理医师沟通,了解组织的性质,清楚标记组织的部位。包埋分大小标本,大标本如果是大而平的组织,易于包埋定位,只要将最大最平的组织面朝下置于包埋即可。特殊需要的组织面可用墨汁标记,也要认清墨汁标记的是底部是蒂部还是浆膜面或是切缘,包埋时要准确定位方向。如果是多块点状或碎块组织,如胃、肠黏膜、淋巴结,或者前列腺电切等组织,包埋在同一蜡块中,正确的包埋模式应该以线状排列为佳,不要将组织随意摆放在蜡块中,而应小心地将它们沿直线状排列,沿长轴方向平行排列,确保病理医师阅片时不遗漏组织。如果是囊壁样组织以横切面竖立方向包埋为准,切片时能切到组织全层。如果是皮肤组织应该使表皮层方向朝下,真皮层方向朝上,组织切片时不易损伤组织,保证切片完整,减少切片的裂隙。包埋操作时具体的注意事项:先取大小合适的蜡块模型,注入蜡液置于热台上,液面刚好与模型的上缘平齐,最好低于或高于此限。取出包埋盒内的组织,特别需要提醒的是打开包埋盒盖的时候要小心规范,科里现在每天的蜡块是号码朝上排序脱水,某些较小的组织容易卡在盒与盖中间,打开盖时组织容易飞出来,要避免组织丢失待来不必要的麻烦。然后用干净的热镊子将所有组织悉数放入模型的底部,待组织与模型内的蜡液充分融合后,按要求排列后迅速移动模型至冷台,底部石蜡刚开始凝固,用镊子轻压组织数秒,待组织埋平后,迅速盖上包埋盒注上蜡液,放于冻台冷却。注意液面高度不得高于包埋盒上缘,加盖包埋盒时一定要保持其与模型底部平面平行,无前后、左右倾斜的现象,否则蜡块不能与切片机夹具完全吻合,造成切片时松动震颤,影响切片质量。在组织定位后,石蜡刚开始冷却时,要轻压组织,否则组织切片就不容易切全,造成切片不完整。硬组织尤其是脱钙后的骨组织,包埋方向显得尤为重要,否则很难得到一张完整的组织切片。如果沿对角线包埋,情况可能会改善很多,因为切片刀是一点一点地接触到组织,而不是像横过来包埋时,一下子全接触到骨组织,导致切片时组织崩掉。包埋时最好养成一个良好习惯,打开一个包埋盒,包埋一份组织,包好一个再打开下一个。千万不要同时打开好几个包埋盒,同时包埋,这样容易手忙脚乱,更容易造成组织混淆。每包埋完一个组织,特别是宫腔刮出物等碎组织,一定要用纸巾擦拭干净,防止组织组织残留造成交叉污染。石蜡组织包埋后,蜡块要尽快冷却,形成蜡块最小的结晶体,既减少石蜡的疏松,又增加石蜡的密度。小的结晶体有助于使石蜡紧紧包裹被包埋的组织,为良好切片提供有利保证,如果包埋后石蜡与组织分离,留有间隙,切片就难以完整也容易崩。现在科室制度越来越完善,也建立起了包埋质控,每天记录包埋蜡块总数,及时发现错误及时改正。组织的方向是包埋的重要步骤,否则,不恰当的组织定位或排列方向会导致切片时毁坏组织。
《组织病理学技术》让我受益匪浅,也应该多读几遍,把书读薄。读万卷书,行万里路,走在书的海洋,一定可以让自己在生活及工作中事倍功半,也努力争取多的实践机会,丰富自己的经验,增加人生的厚度和宽度。